在高效液相色譜分析中，當色譜柱的選擇確定后，應采用適合組成的流動相進行實驗，在實驗過程準確控制流動相的流量，防止微米數(shù)量級機械雜質(zhì)阻塞流路，保持較低的柱壓力降是實驗操作中的關(guān)鍵。為此，色譜工作者應當掌握以下的實驗技術(shù)：
溶劑的純化技術(shù)。
在高效液相色譜分析中，正相色譜以己烷作為流動相主體，二氯甲烷、氯仿、乙醚作為改性劑；反相色譜以水作為流動相主體，以甲醇、乙腈、四氫呋喃作為改性劑。通常使用分析純、優(yōu)級純試劑，可以滿足高效液相色譜分析的要求，但為了防止微粒雜質(zhì)堵塞流路或柱入口墊片，流動相都需要用G4微孔玻璃漏斗過濾，或用0.45μm的微孔濾膜過濾后再使用。
色譜柱的填充技術(shù)。
填充色譜柱的方法，根據(jù)固定相微粒的大小有干法和濕法兩種。微粒大于20μm的可用干法填充，要邊填充邊敲打和振動，要填得均勻扎實。直徑10μm以下的柱，不能用干法填充，必須采用濕法。
色譜柱的保護與再生技術(shù)。
高效液相色譜柱填充了高效全多孔球形微粒固定相，并用高壓勻漿法填充，其售價較貴，若使用不當，會出現(xiàn)柱理論塔板數(shù)下降、色譜峰形變壞、柱壓力降增大、保留時間改變等不良現(xiàn)象，從而大大縮短色譜柱的使用壽命。
梯度洗脫技術(shù)。
在HPLC分析中，梯度洗脫功能相似于氣相色譜分析中的程序升溫，它對改善色譜分離效果，增加峰容量，可發(fā)揮重要的作用。
色譜柱前和柱后的衍生化檢測技術(shù)。
當前在高效液相色譜法，最常用的高靈敏度檢測器是熒光檢測器和紫外檢測器，但它們只能檢測有紫外吸收或在紫外光照射下產(chǎn)生熒光的、具有特定化學結(jié)構(gòu)的化合物。
為了使在這些檢測器上響應值很小的化合物也能被檢測出來，通過與衍生化試劑反應，使胺、氨基酸、羧酸、醇、醛、酮等有機物生成可吸收紫外光或產(chǎn)生熒光的化合物。
樣品的預處理技術(shù)。
對組成復雜的樣品或受外界條件（日光照射、受熱、電磁輻射、氧化等）作用而發(fā)生變化的不穩(wěn)定樣品，都需經(jīng)過預處理才能進行色譜分析。
掌握上述各種技術(shù)，就可更自主的開展工作，并為進一步從事微柱液相色譜分析或二維液相色譜分析創(chuàng)造良好的前提工作條件。